Afin d’extraire et purifier du matériel biologique (protéines, enzymes…), plusieurs techniques successives sont utilisées.
L’extraction peut être réalisée par broyage, par décantation... On obtient un extrait brut qu’il faut purifier c’est-à-dire éliminer les contaminants. Les techniques de purification sont choisies en fonction du but de la manipulation :
- La centrifugation. Elle permet de séparer les constituants d’un mélange grâce à une vitesse différentielle (ultracentrifugation) ou grâce à un gradient de densité (centrifugation isopycnique).
- L’électrophorèse. C’est une technique qui permet de séparer les molécules chargées en fonction de leurs masses moléculaires ou de leurs charges sous l’effet d’un champ électrique.
- La chromatographie. Elle permet de séparer les molécules le long d’une phase stationnaire à l’aide d’une phase mobile. Les solutés du mélange sont séparés selon la polarité dans le cas d’une chromatographie d’adsorption ou selon leur solubilité dans une chromatograhie de partage.
Contrôler la qualité de chaque étape de purification est indispensable pour s’assurer de l’élimination des contaminants. Deux paramètres sont étudiés :
- Le rendement. Il permet d’estimer les pertes de la molécule d’intérêt. Sa valeur doit diminuer le moins possible d’une étape à l’autre.
- Le facteur de purification. Ce facteur doit augmenter d’une étape à l’autre.
